ប្រេង Saposhnikovia divaricata សុទ្ធសម្រាប់ធ្វើទៀន និងសាប៊ូ លក់ដុំ ប្រេងក្រអូបបំពងក្លិនថ្មីសម្រាប់ដុតដើមត្រែង

ការពិពណ៌នាខ្លី៖

 

២.១. ការរៀបចំ SDE

ឫស​រុក្ខជាតិ SD ត្រូវ​បាន​ទិញ​ជា​ឱសថ​ស្ងួត​ពី​ក្រុមហ៊ុន Hanherb Co. (Guri ប្រទេស​កូរ៉េ)។ សម្ភារៈ​រុក្ខជាតិ​ត្រូវ​បាន​បញ្ជាក់​តាម​លំដាប់​ថ្នាក់​ដោយ​លោក​វេជ្ជបណ្ឌិត Go-Ya Choi មកពី​វិទ្យាស្ថាន​វេជ្ជសាស្ត្រ​បូព៌ា​កូរ៉េ (KIOM)។ គំរូ​ប័ណ្ណ (លេខ 2014 SDE-6) ត្រូវ​បាន​ដាក់​ទុក​ក្នុង​ឃ្លាំង​ធនធាន​ឱសថ​ស្តង់ដារ​កូរ៉េ។ ឫស​រុក្ខជាតិ SD ស្ងួត (320 ក្រាម) ត្រូវ​បាន​ស្រង់​ចេញ​ពីរ​ដង​ជាមួយ​អេតាណុល 70% (ជាមួយ​នឹង​ការ​ច្រោះ​រយៈពេល 2 ម៉ោង) ហើយ​សារធាតុ​ចម្រាញ់​ត្រូវ​បាន​ប្រមូលផ្តុំ​ក្រោម​សម្ពាធ​ថយ​ចុះ។ ទឹក​ដាំ​ត្រូវ​បាន​ច្រោះ ស្ងួត​ហើយ​រក្សា​ទុក​នៅ​សីតុណ្ហភាព 4°C។ ទិន្នផល​នៃ​សារធាតុ​ចម្រាញ់​ស្ងួត​ពី​វត្ថុធាតុដើម​ចាប់ផ្តើម​ឆៅ​គឺ 48.13% (w/w)។

 

២.២. ការវិភាគក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណើរការខ្ពស់ (HPLC) បរិមាណ

ការវិភាគក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីត្រូវបានអនុវត្តជាមួយប្រព័ន្ធ HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) និងឧបករណ៍ចាប់អារេហ្វូតូឌីយ៉ូត។ សម្រាប់ការវិភាគ HPLC នៃ SDE បឋម-O-ស្តង់ដារ glucosylcimifugin ត្រូវបានទិញពីវិទ្យាស្ថានលើកកម្ពស់ឧស្សាហកម្មឱសថបុរាណកូរ៉េ (ក្យុងសាន កូរ៉េ) និងវិនាទី-O-គ្លូកូស៊ីលហាម៉ូដុល និង ៤′-O-β-ឌី-គ្លូកូស៊ីល-៥-O-methylvisamminol ត្រូវបានញែកចេញនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍របស់យើង ហើយត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយការវិភាគវិសាលគម ជាចម្បងដោយ NMR និង MS។

គំរូ SDE (0.1 មីលីក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុងអេតាណុល 70% (10 មីលីលីត្រ)។ ការបំបែកក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីត្រូវបានអនុវត្តជាមួយជួរឈរ XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 ម.ម, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA)។ ដំណាក់កាលចល័តមាន acetonitrile (A) និងអាស៊ីតអាសេទិក 0.1% ក្នុងទឹក (B) ក្នុងអត្រាលំហូរ 1.0 mL/នាទី។ កម្មវិធីជម្រាលច្រើនជំហានត្រូវបានប្រើដូចខាងក្រោម៖ 5% A (0 នាទី), 5–20% A (0–10 នាទី), 20% A (10–23 នាទី) និង 20–65% A (23–40 នាទី)។ រលកពន្លឺរកឃើញត្រូវបានស្កេននៅ 210–400 nm ហើយកត់ត្រានៅ 254 nm។ បរិមាណចាក់គឺ 10.0μL. ដំណោះស្រាយស្តង់ដារសម្រាប់ការកំណត់ក្រូម៉ូនចំនួនបីត្រូវបានរៀបចំនៅកំហាប់ចុងក្រោយ 7.781 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ (prim-O-គ្លូកូស៊ីលស៊ីមីហ្វូជីន), ៣១,១២៥ មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ (៤′-O-β-ឌី-គ្លូកូស៊ីល-៥-O-មេទីលវីសាំមីណុល) និង ៣១,១២៥ មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ (វិនាទី-O-គ្លូកូស៊ីលហាម៉ាអ៊ូដុល) ក្នុងមេតាណុល ហើយរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព ៤អង្សាសេ។

២.៣. ការវាយតម្លៃសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងការរលាកក្នុងវីត្រូ

២.៣.១. ការដាំដុះកោសិកា និងការព្យាបាលគំរូ

កោសិកា RAW 264.7 ត្រូវបានទទួលពីការប្រមូលផ្ដុំវប្បធម៌ប្រភេទអាមេរិក (ATCC, Manassas, VA, សហរដ្ឋអាមេរិក) ហើយដាំដុះក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុក DMEM ដែលមានថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិច 1% និង FBS 5.5%។ កោសិកាត្រូវបានភ្ញាស់ក្នុងបរិយាកាសសំណើម 5% CO2 នៅសីតុណ្ហភាព 37°C។ ដើម្បីជំរុញកោសិកា ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានជំនួសដោយឧបករណ៍ផ្ទុក DMEM ស្រស់ និង lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, សហរដ្ឋអាមេរិក) នៅសីតុណ្ហភាព 1...μក្រាម/មីលីលីត្រ ត្រូវបានបន្ថែមនៅក្នុងវត្តមាន ឬអវត្តមាននៃ SDE (200 ឬ 400μក្រាម/មីលីលីត្រ) សម្រាប់រយៈពេល 24 ម៉ោងបន្ថែម។

២.៣.២. ការកំណត់អុកស៊ីដអាសូត (NO), ប្រូស្តាហ្គ្លែនឌីន E2 (PGE2), កត្តារលួយដុំសាច់α(TNF-α), និងការផលិត Interleukin-6 (IL-6)

កោសិកាត្រូវបានព្យាបាលដោយ SDE និងជំរុញដោយ LPS រយៈពេល 24 ម៉ោង។ ការផលិត NO ត្រូវបានវិភាគដោយការវាស់នីទ្រីតដោយប្រើសារធាតុ Griess យោងតាមការសិក្សាមុន [12]. ការបញ្ចេញ cytokines រលាក PGE2, TNF-αនិង IL-6 ត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើឧបករណ៍ ELISA (ប្រព័ន្ធ R&D) ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។ ផលប៉ះពាល់នៃ SDE លើការផលិត NO និង cytokine ត្រូវបានកំណត់នៅ 540 nm ឬ 450 nm ដោយប្រើ Wallac EnVision™ឧបករណ៍អានមីក្រូផ្លាត (PerkinElmer)។

២.៤. ការវាយតម្លៃសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងជំងឺរលាកសន្លាក់ឆ្អឹងនៅក្នុង Vivo

២.៤.១. សត្វ

កណ្តុរ Sprague-Dawley ឈ្មោល (អាយុ 7 សប្តាហ៍) ត្រូវបានទិញពីក្រុមហ៊ុន Samtako Inc. (Osan ប្រទេសកូរ៉េ) ហើយត្រូវបានដាក់ឱ្យនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌដែលគ្រប់គ្រងជាមួយនឹងវដ្តពន្លឺ/ងងឹតរយៈពេល 12 ម៉ោងនៅ°C និង% សំណើម។ កណ្តុរត្រូវបានផ្តល់អាហារ និងទឹកសម្រាប់មន្ទីរពិសោធន៍ដោយសេរីនីតិវិធីពិសោធន៍ទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តស្របតាមគោលការណ៍ណែនាំរបស់វិទ្យាស្ថានសុខភាពជាតិ (NIH) និងត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វនៃសាកលវិទ្យាល័យ Daejeon (Daejeon សាធារណរដ្ឋកូរ៉េ)។

២.៤.២. ការបង្ក​ជំងឺ OA ជាមួយ MIA ចំពោះ​សត្វ​កណ្ដុរ

សត្វទាំងនោះត្រូវបានជ្រើសរើសដោយចៃដន្យ និងចាត់ចូលទៅក្នុងក្រុមព្យាបាលមុនពេលចាប់ផ្តើមការសិក្សា (ក្នុងមួយក្រុម)។ ដំណោះស្រាយ MIA (3 មីលីក្រាម/50μ(លីត្រ 0.9% នៃជាតិប្រៃ) ត្រូវបានចាក់ដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងចន្លោះក្នុងសន្លាក់នៃជង្គង់ខាងស្តាំក្រោមការប្រើថ្នាំសន្លប់ដែលបង្កឡើងដោយល្បាយ ketamine និង xylazine។ កណ្តុរត្រូវបានបែងចែកជាបួនក្រុមដោយចៃដន្យ៖ (1) ក្រុមជាតិប្រៃដែលមិនចាក់ MIA (2) ក្រុម MIA ដែលចាក់ MIA (3) ក្រុមដែលបានព្យាបាលដោយ SDE (200 mg/kg) ដែលចាក់ MIA និង (4) ក្រុមដែលបានព្យាបាលដោយ indomethacin- (IM-) (2 mg/kg) ដែលចាក់ MIA។ កណ្តុរត្រូវបានផ្តល់តាមមាត់ជាមួយ SDE និង IM 1 សប្តាហ៍មុនពេលចាក់ MIA រយៈពេល 4 សប្តាហ៍។ កម្រិតថ្នាំ SDE និង IM ដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះគឺផ្អែកលើកម្រិតថ្នាំដែលប្រើក្នុងការសិក្សាមុនៗ [10,13,14].

២.៤.៣. ការវាស់វែងនៃការចែកចាយទម្ងន់ជើងក្រោយ

បន្ទាប់ពីការបញ្ចូល OA តុល្យភាពដើមនៃសមត្ថភាពទ្រទម្ងន់របស់ជើងក្រោយត្រូវបានរំខាន។ ឧបករណ៍សាកល្បងអសមត្ថភាព (ឧបករណ៍ Linton, Norfolk, ចក្រភពអង់គ្លេស) ត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងការអត់ធ្មត់ទ្រទម្ងន់។ កណ្តុរត្រូវបានដាក់ដោយប្រុងប្រយ័ត្ននៅក្នុងបន្ទប់វាស់។ កម្លាំងទ្រទម្ងន់ដែលបញ្ចេញដោយអវយវៈក្រោយត្រូវបានគណនាជាមធ្យមក្នុងរយៈពេល 3 វិនាទី។ សមាមាត្រចែកចាយទម្ងន់ត្រូវបានគណនាដោយសមីការដូចខាងក្រោម៖ [ទម្ងន់លើអវយវៈក្រោយខាងស្តាំ / (ទម្ងន់លើអវយវៈក្រោយខាងស្តាំ + ទម្ងន់លើអវយវៈក្រោយខាងឆ្វេង)] × 100 [15].

២.៤.៤. ការវាស់វែងកម្រិតស៊ីតូគីនក្នុងសេរ៉ូម

សំណាកឈាមត្រូវបានបង្វិលក្នុងកម្លាំង 1,500 ក្រាម រយៈពេល 10 នាទី នៅសីតុណ្ហភាព 4°C; បន្ទាប់មកសេរ៉ូមត្រូវបានប្រមូល និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព −70°C រហូតដល់ការប្រើប្រាស់។ កម្រិតនៃ IL-1β, IL-6, TNF-αនិង PGE2 នៅក្នុងសេរ៉ូមត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍ ELISA ពី R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។

២.៤.៥. ការវិភាគ RT-PCR បរិមាណជាក់ស្តែង

RNA សរុបត្រូវបានស្រង់ចេញពីជាលិកាសន្លាក់ជង្គង់ដោយប្រើ TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ចម្លងបញ្ច្រាសទៅជា cDNA និងពង្រីក PCR ដោយប្រើឧបករណ៍ TM One Step RT PCR ជាមួយ SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA)។ PCR បរិមាណពេលវេលាជាក់ស្តែងត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើប្រព័ន្ធ Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA)។ លំដាប់ primer និងលំដាប់ probe ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាង។1បរិមាណ cDNA គំរូមួយចំនួន និងបរិមាណស្មើគ្នានៃ cDNA GAPDH ត្រូវបានពង្រីកដោយប្រើល្បាយមេ TaqMan® Universal PCR ដែលមាន DNA polymerase ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត (Applied Biosystems, Foster, CA, USA)។ លក្ខខណ្ឌ PCR គឺ 2 នាទី នៅសីតុណ្ហភាព 50°C, 10 នាទី នៅសីតុណ្ហភាព 94°C, 15 វិនាទី នៅសីតុណ្ហភាព 95°C និង 1 នាទី នៅសីតុណ្ហភាព 60°C សម្រាប់ 40 វដ្ត។ កំហាប់នៃហ្សែនគោលដៅត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ Ct ប្រៀបធៀប (ចំនួនវដ្តកម្រិតនៅចំណុចឆ្លងកាត់រវាងគ្រោងពង្រីក និងកម្រិត) ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។

តម្លៃ FOB:០,៥ ដុល្លារអាមេរិក - ៩,៩៩៩ ដុល្លារ / ដុំ

បរិមាណបញ្ជាទិញអប្បបរមា៖១០០ ដុំ/ដុំ

សមត្ថភាពផ្គត់ផ្គង់៖១០០០០ ដុំ/ដុំក្នុងមួយខែ