ប្រេង Saposhnikovia divaricata សុទ្ធសម្រាប់ទៀននិងសាប៊ូធ្វើប្រេងសំខាន់ៗដែលចែកចាយលក់ដុំថ្មីសម្រាប់ឧបករណ៍ដុត Reed

ការពិពណ៌នាសង្ខេប៖

 

២.១. ការរៀបចំ SDE

មែកធាង SD ត្រូវបានទិញជាឱសថស្ងួតពីក្រុមហ៊ុន Hanherb Co. (Guri ប្រទេសកូរ៉េ)។ សមា្ភារៈរុក្ខជាតិត្រូវបានបញ្ជាក់តាមនិទ្ទេសដោយវេជ្ជបណ្ឌិត Go-Ya Choi នៃវិទ្យាស្ថានឱសថបូព៌ាកូរ៉េ (KIOM)។ សំណាកប័ណ្ណទូទាត់មួយ (លេខ 2014 SDE-6) ត្រូវបានដាក់ក្នុងឃ្លាំងឱសថកូរ៉េនៃធនធានឱសថស្តង់ដារ។ មើមស្ងួតរបស់ SD (320 ក្រាម) ត្រូវបានស្រង់ចេញពីរដងជាមួយនឹង 70% អេតាណុល (ជាមួយនឹងការចាល់ជាតិ 2 ម៉ោង) ហើយបន្ទាប់មកការស្រង់ចេញត្រូវបានប្រមូលផ្តុំក្រោមសម្ពាធកាត់បន្ថយ។ decoction ត្រូវបានត្រង lyophilized និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4°C។ ទិន្នផលនៃសារធាតុចម្រាញ់ស្ងួតពីវត្ថុធាតុដើមឆៅគឺ 48.13% (w/w)។

 

២.២. ការវិភាគបរិមាណសមិទ្ធិផលខ្ពស់ Liquid Chromatography (HPLC)

ការវិភាគក្រូម៉ូសូមត្រូវបានអនុវត្តជាមួយប្រព័ន្ធ HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) និងឧបករណ៍ចាប់អារេ photodiode ។ សម្រាប់ការវិភាគ HPLC នៃ SDE, prim-Oស្តង់ដារ -glucosylcimifugin ត្រូវបានទិញពីវិទ្យាស្ថានផ្សព្វផ្សាយកូរ៉េសម្រាប់ឧស្សាហកម្មឱសថបុរាណ (Gyeongsan ប្រទេសកូរ៉េ) និងវិនាទី-O-glucosylhamaudol និង 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol ត្រូវបានញែកដាច់ពីគេក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍របស់យើង និងកំណត់ដោយការវិភាគវិសាលគម ជាចម្បងដោយ NMR និង MS ។

សំណាក SDE (0.1 mg) ត្រូវបានរំលាយក្នុង 70% អេតាណុល (10 mL)។ ការបំបែកក្រូម៉ាតត្រូនិចត្រូវបានអនុវត្តជាមួយជួរឈរ XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 មម, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA)។ ដំណាក់កាលចល័តមាន acetonitrile (A) និង 0.1% acetic acid ក្នុងទឹក (B) ក្នុងអត្រាលំហូរ 1.0 mL/min ។ កម្មវិធីជម្រាលពហុជំហានត្រូវបានប្រើដូចខាងក្រោម៖ 5% A (0 នាទី), 5–20% A (0–10 នាទី), 20% A (10–23 នាទី) និង 20–65% A (23–40 នាទី ) រលកនៃការរកឃើញត្រូវបានស្កេននៅ 210-400 nm និងកត់ត្រានៅ 254 nm ។ បរិមាណចាក់គឺ 10.0μL. ដំណោះស្រាយស្តង់ដារសម្រាប់ការកំណត់ក្រូម៉ូសូមបីត្រូវបានរៀបចំនៅកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 7.781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol) និង ៣១.១២៥ mg/mL (វិនាទី-O-glucosylhamaudol) នៅក្នុងមេតាណុល និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4°C។

២.៣. ការវាយតម្លៃសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងការរលាកនៅក្នុង Vitro

២.៣.១. វប្បធម៌កោសិកា និងការព្យាបាលគំរូ

កោសិកា RAW 264.7 ត្រូវបានទទួលពី American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) ហើយត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុក DMEM ដែលមានអង់ទីប៊ីយ៉ូទិក 1% និង 5.5% FBS ។ កោសិកាត្រូវបាន incubated ក្នុងបរិយាកាសសើមនៃ 5% CO2 នៅ 37 ° C ។ ដើម្បីជំរុញកោសិកា ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានជំនួសដោយឧបករណ៍ផ្ទុក DMEM ស្រស់ និង lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) នៅ 1μg/mL ត្រូវបានបន្ថែមនៅក្នុងវត្តមាន ឬអវត្តមាននៃ SDE (200 ឬ 400μg/ml) សម្រាប់រយៈពេល 24 ម៉ោងបន្ថែម។

២.៣.២. ការ​កំណត់​នៃ Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α) និងផលិតកម្ម Interleukin-6 (IL-6)

កោសិកាត្រូវបានព្យាបាលដោយ SDE និងជំរុញដោយ LPS រយៈពេល 24 ម៉ោង។ គ្មានការផលិតត្រូវបានវិភាគដោយការវាស់ nitrite ដោយប្រើសារធាតុ Griess reagent យោងតាមការសិក្សាពីមុន [12] ការសម្ងាត់នៃ cytokines រលាក PGE2, TNF-αហើយ IL-6 ត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើឧបករណ៍ ELISA (ប្រព័ន្ធ R&D) យោងតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។ ផលប៉ះពាល់នៃ SDE លើ NO និងការផលិត cytokine ត្រូវបានកំណត់នៅ 540 nm ឬ 450 nm ដោយប្រើ Wallac EnVision™ឧបករណ៍អានមីក្រូបន្ទះ (PerkinElmer) ។

២.៤. ការវាយតម្លៃសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងជំងឺសន្លាក់នៅក្នុង Vivo

២.៤.១. សត្វ

សត្វកណ្តុរឈ្មោល Sprague-Dawley (អាយុ 7 សប្តាហ៍) ត្រូវបានទិញពី Samtako Inc. (Osan, Korea) ហើយដាក់នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រប់គ្រងជាមួយនឹងវដ្តពន្លឺ/ងងឹត 12 ម៉ោងនៅ°C និងសំណើម%។ សត្វកណ្ដុរត្រូវបានផ្តល់អាហារដល់មន្ទីរពិសោធន៍ និងទឹក។libitum ការផ្សាយពាណិជ្ជកម្ម. នីតិវិធីពិសោធន៍ទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តដោយអនុលោមតាមគោលការណ៍ណែនាំរបស់វិទ្យាស្ថានសុខភាពជាតិ (NIH) និងត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វនៃសាកលវិទ្យាល័យ Daejeon (Daejeon សាធារណរដ្ឋកូរ៉េ)។

២.៤.២. ការបញ្ចូល OA ជាមួយ MIA នៅក្នុងកណ្តុរ

សត្វ​ត្រូវ​បាន​កំណត់​ដោយ​ចៃដន្យ និង​ចាត់​ឱ្យ​ទៅ​ក្រុម​ព្យាបាល​មុន​ពេល​ចាប់ផ្តើម​ការ​សិក្សា (ក្នុងមួយក្រុម)។ ដំណោះស្រាយ MIA (3 mg/50μលីត្រ អំបិល 0.9%) ត្រូវបានចាក់ដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងចន្លោះខាងក្នុងនៃសន្លាក់ជង្គង់ខាងស្តាំក្រោមការប្រើថ្នាំសន្លប់ដែលបណ្តាលមកពីការលាយបញ្ចូលគ្នានៃ ketamine និង xylazine ។ សត្វកណ្ដុរត្រូវបានបែងចែកដោយចៃដន្យជាបួនក្រុម៖ (1) ក្រុមទឹកប្រៃដែលមិនមានការចាក់ MIA (2) ក្រុម MIA ជាមួយនឹងការចាក់ MIA (3) ក្រុមដែលព្យាបាលដោយ SDE (200 mg/kg) ជាមួយនឹងការចាក់ MIA និង (4) ក្រុមព្យាបាល indomethacin- (IM-) (2 mg/kg) ជាមួយនឹងការចាក់ MIA ។ កណ្តុរត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយផ្ទាល់មាត់ជាមួយ SDE និង IM 1 សប្តាហ៍មុនពេលចាក់ថ្នាំ MIA រយៈពេល 4 សប្តាហ៍។ កំរិតប្រើរបស់ SDE និង IM ដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះគឺផ្អែកលើអ្នកដែលប្រើក្នុងការសិក្សាពីមុន [10,13,14].

២.៤.៣. ការវាស់វែងនៃការចែកចាយទម្ងន់ Hindpaw

បន្ទាប់ពីការបញ្ចូល OA តុល្យភាពដើមនៅក្នុងសមត្ថភាពផ្ទុកទម្ងន់នៃ hindpaws ត្រូវបានរំខាន។ ឧបករណ៍សាកល្បងអសមត្ថភាព (ឧបករណ៍ Linton, Norfolk, ចក្រភពអង់គ្លេស) ត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃការផ្លាស់ប្តូរនៃការអត់ធ្មត់លើទម្ងន់។ សត្វកណ្ដុរត្រូវបានដាក់យ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្នទៅក្នុងបន្ទប់វាស់។ កម្លាំងផ្ទុកទម្ងន់ដែលបញ្ចេញដោយអវយវៈខាងក្រោយគឺជាមធ្យមក្នុងរយៈពេល 3 វិនាទី។ សមាមាត្រការចែកចាយទម្ងន់ត្រូវបានគណនាដោយសមីការខាងក្រោម៖ [ទម្ងន់លើអវយវៈខាងស្ដាំ/(ទម្ងន់លើជើងខាងស្ដាំ + ទម្ងន់លើជើងឆ្វេង)] × 100 [15].

២.៤.៤. ការវាស់វែងកម្រិត Cytokine នៃសេរ៉ូម

សំណាក​ឈាម​ត្រូវ​បាន​ផ្ដោត​នៅ​កម្រិត 1,500 ក្រាម​រយៈពេល 10 នាទី​នៅ​សីតុណ្ហភាព 4°C; បន្ទាប់មកសេរ៉ូមត្រូវបានប្រមូល និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព −70°C រហូតដល់ប្រើប្រាស់។ កម្រិតនៃ IL-1β, IL-6, TNF-αនិង PGE2 នៅក្នុងសេរ៉ូមត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍ ELISA ពី R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) យោងតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។

២.៤.៥. ការវិភាគបរិមាណ RT-PCR ពេលវេលាពិត

RNA សរុបត្រូវបានស្រង់ចេញពីជាលិកាសន្លាក់ជង្គង់ដោយប្រើ TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ដែលត្រូវបានចម្លងទៅជា cDNA និង PCR- amplified ដោយប្រើ TM One Step RT PCR kit ជាមួយ SYBR green (Applied Biosystems , Grand Island, NY, USA). PCR បរិមាណតាមពេលវេលាជាក់ស្តែងត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើប្រព័ន្ធ Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA)។ លំដាប់បឋម និងលំដាប់ស៊ើបអង្កេតត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាង1. Aliquots នៃ cDNAs គំរូ និងបរិមាណស្មើគ្នានៃ GAPDH cDNA ត្រូវបានពង្រីកជាមួយនឹងល្បាយមេ TaqMan® Universal PCR ដែលមាន DNA polymerase យោងតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត (Applied Biosystems, Foster, CA, USA)។ លក្ខខណ្ឌ PCR គឺ 2 នាទីនៅ 50 ° C, 10 នាទីនៅ 94 ° C, 15 s នៅ 95 ° C និង 1 នាទីនៅ 60 ° C សម្រាប់ 40 វដ្ត។ ការផ្តោតអារម្មណ៍នៃហ្សែនគោលដៅត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើ Ct ប្រៀបធៀប (លេខវដ្តកម្រិតនៅចំណុចឆ្លងកាត់រវាងគ្រោងពង្រីក និងកម្រិត) យោងតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។

តម្លៃ FOB៖US$0.5 - 9,999 / ដុំ

បរិមាណការបញ្ជាទិញអប្បបរមា៖100 ដុំ / ដុំ

សមត្ថភាពផ្គត់ផ្គង់៖10000 ដុំ / ដុំក្នុងមួយខែ